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走近试管婴儿——胚胎的形成|细胞|母细胞|精子|囊胚|受精卵
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在取卵医生开始提取卵母细胞之前,胚胎学家要准备好迎接配子的到来。培养环境应该像母亲的身体。所以他们检查房间、培养箱和显微镜台的温度。此外,房间的光线必须随时调暗,以备卵子和胚胎培养。所有培养基和培养皿都准备好迎接卵母细胞的到来。取卵医生吸入卵泡液和卵母细胞,然后将抽吸液和冲洗液交给胚胎学家。在显微镜下,胚胎学家立即检查液体并寻找卵子。如果发现,立即冲洗并转移到为其准备的受精培养基中,然后转移到培养箱中,以便以后检查和分级。成熟卵母细胞放置在培养箱中2-8小时直到受精。未成熟的卵母细胞需要更多的时间,大约24-35小时,才能成熟并准备受精。

卵母细胞的分级取决于受精的方式。如果使用传统的授精方法,它们将按原样分级,周围有积云和辐射冠。通常成熟的卵子看起来像一个美丽的太阳,周围有清晰的扩大的光线。如果受精方法是卵胞浆内单精子注射(ICSI),胚胎学家需要在卵母细胞周围没有卵丘或电晕的情况下自行检查。为此,他们首先用注射器机械清洁卵母细胞周围的细胞,然后在一种叫作透明质酸酶的酶中剥离几秒钟,以完成清洁。透明质酸酶是精子头部在受精过程中释放的一种酶,用于溶解细胞周围的卵母细胞,使其与卵母细胞结合。

现在胚胎学家在显微镜下对卵母细胞有了清晰的观察,他们可以对它们进行分级。一个球形的卵母细胞上附着一个机体,称为成熟卵母细胞,可在2-8小时内受精。如果卵母细胞在培养箱中24小时不成熟,卵母细胞就不可能发育成球形。另外,如果卵母细胞破裂,或没有球形和机体,则视为异常,将被丢弃。

精子准备通常是由研究男性不育的临床科学家完成的,他们被称为男科专家。胚胎学家也可以履行这个角色。精液样本是用一种将精子从细胞和碎片中分离出来的技术。通常情况下,如果男性伴侣不能射精,或者射出的精子很少或没有,医生会进行精子抽吸。

胚胎学家检查精子的质量和数量,决定它们是否适合受精。他们检查精子的形态,看其物理外观、活动性、浓度和游动速度是否正常。如果精子数量和质量正常,则可考虑常规授精。如异常,精子不能自行穿透卵母细胞,直接将精子注入卵母细胞。

如果精子的质量和数量都很好,它将用于常规的授精;否则,将进行ICSI。传统的授精方法是用合格的精子培育成熟的卵母细胞。一般来说,每个卵母细胞都与5-10万个活动精子一起孵育,以获得预期的结果。因此,胚胎学家在一个有受精液的培养皿中,用这个量的精子培养每个卵母细胞12-18小时。在这段时间内,当精子穿透卵母细胞并融合在一起时,可能会发生受精。

如果精子数量少,可以做ICSI,ICSI程序在IVF中非常有效。无论精子特征如何,ICSI都能获得较高的受精率和妊娠率,这使其成为迄今为止治疗男性因素不孕症的最有力的操作程序。胚胎学专家挑选一个精子,固定下来,先把它放进吸管的尾部,这样头部就可以首先插入卵母细胞。卵母细胞应稳定在另一侧,使机体处于12或6点钟位置。然后胚胎学家将精子头注入卵母细胞内的3点钟位置。注射后,这些卵母细胞还需要放置在培养箱中12-18小时。

18小时后,胚胎学家检查它们是否受精。受精的结果是形成一个称为受精卵的细胞。此时需要检查受精卵的原核状态。传统授精产生的受精卵被一层冠细胞覆盖,需要去除这层冠细胞才能看到卵母细胞进行分级。若受精卵是ICSI的结果,则已经是干净的。如果受精卵是正常的,胚胎学专家可以看到它内部有两个原核,表面有两个机体。这两个原核通常被称为2PNs。胚胎学家会仔细检查原核,如果看到3PNs,他们就知道受精卵是不正常的,并将其丢弃。受精过程通常需要24小时,以第一次卵裂结束。合子现在称为胚胎。

胚胎学家确保一切都准备好进行胚胎培养。它们为环境做好准备,这样胚胎就会感觉到自己在母体内分裂。培养基及其pH值、胚群大小、氧气和二氧化碳在胚胎培养中非常重要。正常情况下,受精或ICSI后25-27小时(第一天)胚胎分裂并达到2细胞期。在48小时(第2天)它们达到4-6细胞期,72小时(第3天)8个或更多细胞期,第4天达到桑椹胚,第5天达到囊胚。

不同IVF中心对第1-3天的分级系统可能不同,但主要考虑每天卵裂球或细胞的数量、卵裂球的大小和细胞质破碎程度。即使是大小不等的卵裂球和最小的碎片也意味着胚胎的质量更好。如果胚胎移植是在第3天进行的,这个分级尤其重要。胚胎学家每天都非常仔细地观察和检查每一个胚胎,以便挑选出最合适的胚胎移植到患者体内。

如果移植在第3天没有发生,那么它将持续到第5天胚胎变成囊胚。一般来说,胚泡的分级是根据它们的膨胀程度、孵化状态、内部细胞团(ICM)的发育和营养外胚层的形成来进行的。一个完整的囊胚,具有紧密的ICM和营养外胚层,形成具有许多健康细胞的黏性上皮,通常被认为是一个很好的移植选项。

在移植日,胚胎学家为指定的病人挑选最合格的胚胎。当病人处于正确的体位时,胚胎学家将胚胎吸入导管,并交给医生将其移植到子宫中。当移植程序完成后,医生将导管交还给胚胎学家冲洗并检查材料。这样他们就能确保胚胎移植成功与否。如果有胚胎返回导管,他们会再次重复这个过程。

植入前基因检测(PGT)是指在植入前对卵母细胞或胚胎进行评估的一种方法。它帮助了许多有遗传性基因异常孩子的夫妇。它也揭示了胚胎的性别。如果夫妇感兴趣,胚胎学家可以从胚胎中取出一个或多个细胞,以便日后评估。这个过程非常敏感,胚胎学家必须非常熟练地进行微操作,才能在不损坏胚胎的情况下移除细胞。将对细胞进行染色体分析,并将结果报告给胚胎学家。如果胚胎异常,胚胎学家会通知夫妇,他们可以选择是否丢弃。

对配子(卵子和精子)、受精卵和胚胎进行冷冻或解冻,可以使一次卵子收获后有更多的怀孕机会。大多数情况下病人的胚胎过多,胚胎学家建议冷冻保存。冷冻胚胎让病人有机会决定将来是否要使用。一些中心在2PN合子时冻结多余部分,有些中心在囊胚期冻结。有专家指出,胚胎冷冻效果良好,解冻和移植后以可接受的速率植入。几乎所有卵裂期的标本都能成功冷冻,从2细胞到囊胚。冷冻胚胎相当方便,因为不用紧急的时间安排问题。

冷冻精子通常是男科医生的工作,他们冷冻精液,精液是含有精子的男性生殖液。卵母细胞冷冻对许多有胚胎冷冻问题的人来说是一个很大的帮助。然而,由于卵母细胞独特的生物学特性,冷冻卵母细胞并不容易。近年来,一种称为玻璃化冷冻的新技术为卵母细胞冷冻显示出了希望。在一些体外受精中心,胚胎学家已经开始使用这项技术并取得了良好的效果,但还需要更多的研究来优化这项技术。

胚胎学专家最重要的任务之一是控制和维持胚胎学实验室的质量。为了保持试管受精实验室的高标准实践,胚胎学家需要建立一个质量控制系统。例如,所有的设备都应该定期检查和保养。应定期清洁机罩,并设置和检查培养箱的温度、二氧化碳、水槽水位及其警报。一个常见的质量控制的例子是在每日图表上记录冰箱温度。将这些测量值与先前定义的可接受限值范围进行类比。

所有的材料必须是无毒的,因此胚胎学家在使用它们之前都要进行测试。大多数实验室使用“小鼠试验”来检查材料的质量。大多数与人类配子和胚胎接触的材料,如溶液、培养皿、导管等都要经过测试。用于人类胚胎相同的方式在这些项目中培养两个细胞小鼠胚胎,并对结果进行监测。胚胎学家观察以确保小鼠胚胎从双细胞期到孵化囊胚期的生长。如果一定数量的小鼠胚胎没有达到胚泡阶段,这个项目就失败了。在这种情况下,那些未通过测试的材料将被销毁。